层析柱在层析技术中属于主体，正常用玻璃管or有机玻璃管。一般制备用凝胶柱，直径大于2厘米，层析柱的直径大小不影响别离度，样品用量大，可加大柱的直径，但在加样时应将样品平均散布于凝胶柱上。除此， 直径变大，洗脱液体变大，稀释度变大。别离度取决于柱的高度，为别离不同组分，凝胶柱床一定需要有合适的高度，分离度和柱高平方根有关系，可是因为软凝胶柱过高挤压变形，一般不超越1米。别离时用短柱，一般凝胶柱长20-30厘米，柱高与直径的比较5:1─10:1，凝胶床体积为样品溶液体积的4-10倍。 分级别离时柱高与直径之线为20:1─100:1，常用凝胶柱有50×25厘米，10×25厘米。层析柱滤板的死体积应尽能够的小，假如支掌滤板下的死体积大，那么被别离组分之间重新混合的能够性就大，其后果是影响洗脱峰形，呈现拖尾出象，降低分辩力。在准确别离时，死体积不能超越总床体积的1/1000。